Chaveiro Neurônios hipocampal 3

Distribuição de neurônios hipocampais que expressam EGFP do promotor Nr4a1/Nur77 (Tg(Nr4a1-EGFP)GY139Gsat, www.gensat.org) em hipocampal CA1 marcado para o transportador vesiculoso de glutamato (VGluT1, vermelho, Invitrogen policlonal, 1:1000 e manchado com DAPI (azul) para mostrar camadas de células. A expressão EGFP foi amplificada com frango anti-GFP (Abcam, 1:2000). O VGluT1 rotula terminais excitatórios sinapsos na camada molecular do giro dentado, terminais de fibras mossitas em CA3 e campos dendríticos das células piramidais em stratum orien e stratum radiatum. O Nr4a1-EGFP é fortemente expresso por células piramidais de CA1 e, em menor medida, em células piramidais de CA3 com células dispersas no giro dentado (ver imagens associadas). A seção (40 um, sagittal) foi montada com a Fluoromount G e a imagem foi feita com um objetivo 5X, 0,15 NA num microscópio Zeiss Axiovert. A AF568 foi excitada a 562/40 nm e a emissão coletada a 624/40 nm com filtros de semrock e uma dicroica de banda de solteiro (refletida a 530-585 nm, transmitida de 601-800 nm). A AF488 foi excitada a 482/35 nm e as emissões coletadas a 536/40 nm com filtros de semrock e uma dicroica de banda de solteiro (refletida a 446-499 nm, transmitida de 513-735 nm). A DAPI foi excitada a 350/50 nm e a emissão coletada a 460/50 nm com uma dicroica CLP400 (croma). As imagens de solteiro foram capturadas para cada canal usando um Zeiss Axiocam MR CCD e pseudo-colorido usando Axiovision. A subtração linear de fundo foi usada na imagem apresentada. Ver Davis and Puhl (2011), Pubmed ID 21305052, para obter um protocolo detalhado de coloração e imagens da expressão do EGFP no striatum e na amídala nesta estirpe. Esta imagem faz parte de uma série que caracteriza a expressão EGFP do promotor Nr4a1 em todo o cérebro.